污染是任何蘑菇实验室中最常见的故障来源。几乎总是，这种污染是由于散装底物的制备不当，然后再对蘑菇培养物进行接种。因此，无论是进行研究还是耕种，正确准备真菌底物都是至关重要的第一步。
但是有很多复杂因素：不同的底物（甚至相同底物的不同批次）具有不同的成分，密度，微生物负荷，营养浓度，化学剖面等，他们说，每个散装基材都会以自己的自然载荷到达您需要可靠地减少或消除的竞争性生物和休眠孢子中，以免它们挤出蘑菇。
为了应对这些挑战，建立经过验证的，一致可再现的蘑菇基板准备程序非常重要。拥有一个独立的，可编程的研究级实验室高压灭菌器，使得开发这种程序变得更加容易。
蘑菇底物准备的选项：巴氏灭菌与灭菌
准备蘑菇底物时，您有很多选择。这些倾向于分为两个广泛的类别：
- 真正的灭菌（例如，蒸汽高压灭菌）
- 巴氏杀菌（例如，“传统”基于热的巴氏灭菌或“冷卑鄙的”方法，例如石灰浴，过氧化物浴或冷水发酵）
这里的一个重要区别是，巴氏杀菌仅寻求削弱微生物并杀死底物中存在的致病细菌。巴氏杀菌才不是实际删除/杀死/停用全部底物中存在的生命形式（例如真菌，细菌，病毒，孢子，单细胞真核生物等）。另一方面，灭菌旨在完全破坏所有微生物及其孢子。
巴氏杀菌受到许多可食用的蘑菇种植者的青睐，因为它容易缩放，并且不需要专业设备。只要您正在工作非补充的稻草底物，那既有效又宽容。但是，无法使用巴氏杀菌化制备补充底物（尤其是硬木木屑等较密集的底物）。它们藏有容易生存巴氏杀菌的霉菌，并将在大多数蘑菇有机会获得立足点之前很久就接管了基板。
补充底物，甚至在某些应用中，甚至是普通的稻草底物，都需要完全消毒。
蘑菇培养的热基底物灭菌
但是并非所有灭菌方法都相等。有一系列实验室灭菌选择，每个实验室都具有优势和劣势。蘑菇实验室几乎总是选择基于热的灭菌。关于在土壤和培养底物中掩盖的微生物和大分子，热量比其他策略更具破坏性，包括气态/液体化学灭菌（例如，氧化乙烷或过氧化氢）和γ辐射。
到目前为止，蒸汽灭菌是蘑菇实验室中最常见的方法。（一些真菌耕种者确实使用干热量来进行非裂变蘑菇底物，但这仅在特殊情况下；通常用干热量对底物进行灭菌是适得其反的，因为然后您需要将底物补充水分以培养真菌）。虽然一些蘑菇耕种者依靠像厨房高压锅或散装大气灭菌器单元这样简单的东西，但对于大多数实验室应用，基于高压灭菌的蒸汽灭菌将被证明是最具成本效益，一致和快速策略的（相对于其他解决方案））。这也是最简单的验证（这很重要，因为不良的静息孢子在蘑菇底物中可能是如此韧性）。
蘑菇实验室中的蒸汽灭菌
专门建造的实验室高压灭菌在持续监测下淹没了一个密封的腔室，并带有高压蒸汽。这些可编程单元使大多数实验室灭菌任务非常容易。对于常见任务（例如对玻璃器皿进行灭菌或准备琼脂），它就像装载洗碗机并击中“开始”一样简单。
大多数研究级实验室高压族将在仅15至20分钟内对设备和用品（手术刀，烧杯等）进行消毒。增长媒体准备是另一项常见的任务，尤其是如果您的高压釜有特殊的液体处理或“媒体准备”周期。使用可编程的实验室高压灭菌器，准备琼脂，散装营养/生长培养基或培养皿需要15至45分钟（取决于体积）。
也就是说，由于底物的多样性，底物灭菌非常棘手，并且由于灭菌时间因底物体积而巨大（不一定是线性）变化。例如，小卷中的硬木木屑可以在不到20分钟的时间内对其进行消毒，而在块或大袋中相同的木屑可能需要超过2.5小时。谷物生成的罐子同样可以花费45分钟到两个小时。
不管您的灭菌任务如何，每个实验室都需要开发几种底物灭菌方案（对于各种底物，大小和准备工作）。这些中的每一个都需要用优质的生物学指标仔细验证（例如独立的生物学指标（SCBI），迷你独立的生物学指标（MSCBI），或独立的孢子安木木）。
适当的蘑菇实验室高压釜安装
我们有时会听到有关耕种者从高压灭菌器中“回收”蒸汽并将其注入水果室的蒸汽的一种经济有效方法，以保持高湿度的蘑菇。虽然这可能是在较小的蘑菇农场和种植操作中可以接受的，在这些蘑菇农场和种植操作中，它们严格处理可食用的真菌并且没有其他实验室操作，但我们建议在任何真菌学实验室中不要进行这种做法。
首先，通常，我们建议实验可以使用直径不少于30mm（〜1英寸）的耐热管来排出建筑物之外，远高于地面。总是有潜力，在高压灭菌周期的某些部分，可以通过水蒸气将生存的孢子短距离。此外，如果您定期使用高压灭菌器来处理潜在的危险/致病/受污染的废物，那么这两种废物都是明智的选择，即在建筑物外排气并直接连接到建筑物卫生下水道排水管。
实际上，如果您要运行包括自由式或真空选择的周期，那么您还需要在建筑物外发泄并直接进入卫生下水道：这些操作可能会产生大量的废水和蒸汽。
此外，“回收”蒸汽倾向于在水果室造成正压，该蒸汽具有从实验室其他地方（包括接种和孵化空间）中分散蘑菇孢子和污染物的风险。
制定可靠的底物灭菌程序
这是建立基于高压灭菌的底物灭菌过程的好起点：
- 准备几个相同的金属托盘的底物，在托盘中均匀地层均匀地分层
- 样品中的嵌入生物学指标（BI），确保在质量中心有一个，沿托盘的长度在各个深度上有几个
- 在121ºC或135ºC时处理30分钟或20分钟的托盘
- 孵化您的二重
- 如果BIS没有任何活动（即，孵育48小时后不要更改颜色/浊度），则您的过程已验证
- 如果最初的灭菌过程没有使BIS灭活，请重复一个相同的底物托盘（相同的样式托盘，相同的土壤类型，相同的土壤深度，相同的孢子和孢子安培位置），但将其处理是第一个的两倍。孵化那些双子。如果仍然显而易见生物活性，请再次重复处理原始周期时间的三倍。（注意：许多实验室发现一个30分钟的周期足够，尽管90分钟的周期并不罕见。）
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